半体内法（尼龙袋法）评定梅花梅花鹿饲料营养价值

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近年来，由于反刍动物新蛋白质体系的建立，将反刍动物对蛋白质的需要分为瘤胃微生物蛋白质和过瘤胃蛋白质，故必须测定饲料蛋白质在瘤胃内的降解率。常用尼龙袋法测定，该法具有既能较好反映瘤胃的实际消化生理状况，又简便易行，但其使用效果受很多因素的影响，根据梅花鹿本身的生理特点和试验结果，现将尼龙袋法评定梅花鹿饲料营养价值的操作过程简述如下。
（一）试验梅花鹿的选择
试梅花鹿应健康，体重相近，年龄相同，有至少3头成年梅花公梅花鹿为宜，以减少试验误差O
（二）安装瘤胃痿管要求
安装的瘤胃痿管应由特制的高弹、高强度、耐腐蚀的无毒橡胶制成，要安装牢固，避免脱落，每半年应更换一次痿管。
（三）饲养管理条件
将梅花鹿在1.3倍维持营养水平的条件下饲养，日粮精粗比为6：4,精料的组成应在3种以上，粗蛋白质水平应为18%左右，日喂3次（8：00,12：00,16:00）,试验期应保持日粮的组成和喂量不变，自由饮水，单圈专人饲养。
（四） 被测样本的制备
将待测样品粉碎至通过2.5ml筛孔，再将粉碎后样本用1mm筛孔分离,取1〜2.5ml粒度的样本混合均匀后，放低温冰柜中待用，装袋时将其从冰柜中取出，放入70Y烘箱烘48小时至恒重，即成被测样本。
（五） 尼龙袋原料和规格及制作
尼龙袋原料和规格对饲料降解率测定有直接影响，应统一选择孔眼35〜50呻的尼龙布，裁成17cmx13cm的长方块，对折，用涤纶线缝双道,制成长乘宽为12cmx8cm的尼龙袋，散边用烙铁烫平。
（六） 培养时间
尼龙袋在瘤胃停留时间，精料为2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、36小时、48小时，粗料为6小时、12小时、24小时、36小时、48小时、72小时，对难以消化的玉米秸培养时间应延长到240小时为宜。
（七） 放、取袋
准确称取待测样品（精料4g,粗料2g）放入一个尼龙袋内，每个样本设3个重复（分别放在3个梅花鹿瘤胃中），袋之间样品重量的差异控制在lOOmg以内。将3个样本袋夹在一根长20cm半软性塑料管一端上，借助一木棒将袋送入瘤胃腹囊处，管的另一端用医用缝合线与痿管盖连接系上。放袋时应先将样品用水浸湿，以减少对梅花鹿的应激，每头梅花鹿最多放12个袋，每次放袋都要在晨饲后2小时。将同一时间点的样本同时放入同时取出，取放袋都要在化学麻醉保定下完成，取出的尼龙袋放入低温冰柜中1小时。
（八）冲洗
从冰柜中取出尼龙袋，然后在室温下用自来水冲洗，尤其是将袋口处非样品残渣冲洗干净，冲洗时用手轻轻抚动袋子，直至水清为止，不要用力过猛或拧、捏袋子。每次冲洗时间应保持大致相同，由同一人完成。
（九）测定残渣中干物质量、残渣和样本中的蛋白质含量和有机物含量
将洗好的尼龙袋从管上取下放入70Y烘箱烘至恒重（48小时），称袋加渣重，然后测定残渣中蛋白质含量和有机物含量。再将空袋洗净烘至恒重（70Y,24小时），测袋重以求残渣量。原样本中的蛋白质含量和有机物含量也是在相同条件下测定。
（十）某时间点降解率的计算
被测样本某时间点干物质降解率（%）=（1-残渣量/放入袋内样本量）xlOO
被测样本某时间点蛋白质和有机物的降解率（%）=（1-残渣的蛋白质和有机物量/放入袋内蛋白质和有机物量）x100
（十一）待测饲料瘤胃外流速度的测定
按待测饲料干物质4%-14%的比例称取重铭酸钠，溶于温水中，倒入待测饲料，搅拌成稠粥状，用带盖搪瓷盘盛着，于10。。（：烘箱内加热24小时，取出后用自来水反复冲洗，至水清为止，再将饲料悬浮于清水中，pH值为9左右，加入抗坏血酸，待pH值降到4,搅拌后，静置12小时，最后放在100T：烘箱内烘24小时，制成馅标记的待测饲料。将铭标记好的待测饲料，在晨饲时与精料混合均匀，一起喂给试验梅花鹿，或直接由瘤胃痿管投入到瘤胃中，用量为0.2kg/头。在投喂后的第4、第8、第12、第16、第20、第24、第28、第32、第36、第40、第44、第48、第54、第60、第72、第84、第96、第108、第120小时由直肠取粪样，65Y烘干，粉碎粒度过1ml筛，用比色法测定粪中三氧化二倍的含量。饲料瘤胃外流速度（Kp值）计算是根据最小二乘法得到的，其公式为Ft=Foe-Kp,式中，E为粪中三氧化二铭的含量达到高峰时的含量，F。为零时刻该曲线在Y轴上的截距，t为曲线下降后的采样时间，e为自然对数的底。
（十二）有效降解率的计算
根据中rskovr和Mcdonald（1979）的公式
求出饲料有效降解率。即：dP=a+b（1-e-ct）P=a+bc/（C+k）式中，dP为某时间点消失率，a、b分别为快慢消失部分，C为b的消失速度常数，p为有效消失率，k为饲料的瘤胃外流速度常数，t为袋在瘤胃内培养时间。