在饲料中常常污染上霉菌,霉菌有多种多样,其共同点是有细胞壁,不含叶绿素,无根茎叶,以寄生或腐生的方式存在。仅有少数类群为单细胞,其他都有分枝或不分枝的丝状体,能进行有性或无性繁殖的一类微生物。可引起梅花鹿急性或慢性中毒,因此,对饲料进行霉菌的检测具有重要意义。
1.常规性检验
采样,准备好灭菌容器和采样工具,取有代表性样品,应尽快送检,否则应放低温干燥处。一般取250〜500g样品装入灭菌容器内送检。然后,在无菌操作下称取送检样品25g,放入含有250ml灭菌水的玻璃塞三角瓶中,振摇30min,即为1:10稀释液。用灭菌吸管取1:10稀释液10ml,注入试管中,另用带橡皮乳头的1ml灭菌吸管反复吹吸达50次,使霉菌抱子充分散开。取1ml稀释液注入9ml灭菌水的试管中,另换一支lml灭菌吸管吹吸5次,即为1:100稀释液。按上述操作顺序作10倍递增稀释液,每稀释1次,换用一支1ml灭菌吸管,根据对样品污染情况的估计,选择3个合适的稀释度,分别在作10倍稀释的同时,吸取1ml稀释液于灭菌皿中,每个稀释度作2个平皿,然后将凉至452左右的高盐培养基注入灭菌皿中,待琼脂凝固后,倒置于25~28二温箱中,3d后开始观察,共培养观察1周。通常选择菌落数在20〜100的平皿进行计数,同一稀释度2个平皿的菌落平均数乘以稀释倍数,即为每克样品中所含霉菌抱子数。
2.霉菌直接镜检计数法检验
取定量检样,加蒸僧水稀释至折光指数为1.2447~1.3460(即浓度为7.9%-8.8%备用。将显微镜按放大率90〜125倍调节标准视野,其直径为1.382mm。洗净郝氏计测玻片,将制好的标准样液,用玻璃棒均匀的摊布于计测室,以备观察。将制好的载玻片放于显微镜标准视野下进行观察,要求每个检样应观察50个视野,最好同一检样两人进行观察。发现有霉菌菌丝,其长度超过标准视野(1.382mm)的1/6或三根菌丝总长度超过标准视野(1.382mm)的1/6(即测微器的一格)时即为阳性(+),否则为阴性(-)o按100个视野计,其中发现有霉菌菌丝体存在的视野数即为霉菌的视野百分数。
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