(一)输精时间及部位
母梅花鹿排卵后,卵子在输卵管壶腹部遇到活力旺盛的精子,就能有较高的受胎率。但目前梅花鹿发情后何时排卵,卵子、精子到达受精部位的时间还不清楚,依据现有的经验认为,母梅花鹿发情后12-14小时输精为好。也有人认为,母梅花鹿发情后不再接受公梅花鹿爬跨之时输精,受胎率最高。韩欢胜2015年报道,发情盛期的I期到ID期受胎率分别是83.3%、86.5%、79.1%,受胎率明显高于整个发情期输精总的受胎率71.5%。梅花鹿输精部位目前只能做到子宫体内输精,而梅花鹿的子宫体很小,只有3cm,所以输精器不能插得太深,深则插到子宫角内,如输精到无排卵的一侧子宫角,则会造成空怀。有条件的可用直把输精法解决。贾海明2009年证明,腹腔镜子宫内鲜精输精的受胎率达到86.67%,极显著高于子宫颈口鲜精输精的受胎率36.84%;腹腔镜子宫内冻精输精的受胎率达到85.71%,极显著高于子宫颈口冻精输精的受胎率32.00%。诱导发情的最佳输精时间是在撤栓后的48小时和54小时,输精的受胎率可以分别达到80%和91.43%。
(二)输精准备工作
主要准备好解冻液、输精器、8号或9号封闭针头、腹腔镜、保定器以及与精液接触的器具等,并要按规定进行消毒。保定:用眠乃宁、梅花鹿眠宝保定、起升保定架。开膛器:梅花鹿用开膛器过去使用羊的开膛器;1994年赵世臻首次改用玻璃管式开膛器,玻璃管长22~23cm,外径2.9-3.2cm,管壁厚0.2cm;也有人用塑料管做开膛器。输精器具:细管精液,用牛或羊用凯苏输精器(枪)。鲜精液,羊用注射器式的输精器。
(三)输精操作
1.开膛器输精
先将精液解冻,放入输精枪内备用。母梅花鹿保定稳妥后,外阴消毒,一手握涂有少量滑润剂的开膛器,一手掰开阴唇,将开膛器向斜上方由阴唇插入,后转向下方推进,打开光源,看准粉红色的子宫颈,将输精器对准子宫颈口(子宫颈呈瓣状,发情初期为粉红色,发情旺期和后期呈粉白色,阴道内的黏液发情初期稀薄透明,pH值6.5~7.0,中后期变浊白黏稠,pH值7.0〜8.0,此时输精较易受孕)向里推进。因子宫颈壁褶的阻挡推进有些困难,可转动输精器或调整方向,稍用捻力,进入宫体时能听到“噗”的一声。这时再推进1cm即可注入精液。一般80%的母梅花鹿可做到子宫内输精。输精后抽出开膛器等,清洗消毒备用。将母梅花鹿送到梅花鹿舍解除麻醉。
2. 直肠握颈输精
梅花鹿也可如牛那样采取直肠握颈输精,效果最好,但必须手小(手呈锥形,最大周径不超过19cm)才能伸入到直肠内,输精员要经过严格的技术培训。
3. 腹腔镜输精
用试情法鉴定母梅花鹿发情后,在输精前应禁食禁水12小时,以减少胃肠内容物容积,便于找到子官角和卵巢。将发情母梅花鹿麻醉后固定在保定架上,梅花鹿呈头低、臀高仰卧姿势,将乳房前部腹部的被毛剪净,以便观察乳静脉所在部位。并将剪毛区擦洗、消毒;起升保定架后部,使梅花鹿头部低下,以使腹腔内脏前移;在乳房前10~12cm、腹中线一侧4〜5cm处插入气腹针,并向腹腔内充气,以增加腹腔内压,将脏器压向前部,增大腹腔空间;充气应利用干冰产生二氧化碳气体,但在实践中多有不便,可以用普通的打气桶向腹腔充气,但需要在气桶和气腹针之间放置两层浸过消毒液的纱布,以防止感染。在乳房前10~12cm,腹中线另侧3~4cm处,用套管针刺穿腹壁,穿透腹膜即可,取出套管针芯,将内窥镜由套管内插入腹腔。穿刺应注意避开乳静脉,如刺破小血管出血时,可用止血钳止血。内窥镜进入腹腔后,借助窥视管寻找子宫角,子宫角一般在膀胱前,呈浅粉白色,较硬,如找卵巢时则可沿子宫角向前延伸,找到输卵管及输卵管伞,即可看见卵巢,如蚕豆大小,白色,有时卵巢被伞包围,可用气腹针轻轻拨开伞,即可见到卵巢,有时还能看见排卵窝。找到子宫角后,用注射器吸取精液,装上8号封闭针头,从腹腔镜附近对准子宫角方向刺入腹腔,当视野中观察到针头时,将针头刺入子宫角。如该侧正好是卵巢排卵的一侧,注入精液即可。如看不到排卵情况,用同样方法,将精液注入到另侧子宫角。输精后母梅花鹿术部用碘酊消毒,并撒布消炎粉。目前,用腹腔镜法输精,母梅花鹿受精率在50%〜86%,随着繁育技术的发展,受胎率还会提高。
4. 输精量及输精次数
目前的电刺激采精,原精液量为1~1.5ml,做5倍稀释后为5~7.5ml则每毫升含精子1.5亿〜2亿个,鲜精输精可输0.2~lml。冻精输精现在使用0.25ml细管,每管含直线前进运动精子1500万个,每次输1支。梅花鹿现在多实行一次输精。
5.提高梅花鹿人工授精、受胎率的技术要点
原精不合格不冻,冻后不合格不贮,解冻不合格不输;精液保存好,输精时机好,输精部位好;严格全面培训,严格质量管理,严格输精操作;输精要讲卫生、认真消毒;输精时要适深、慢送、轻注、缓出;记录要完整详细;精液分发要在液氮中进行,操作敏捷,罐内勿缺液氮;做好输精母梅花鹿的饲养管理。
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