梅花鹿布鲁氏菌病怎样预防和治疗

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布鲁氏菌病是由布鲁氏菌引起的人、畜共患慢性传染病。世界动物卫生组织将其列为B类动物疫病，我国将其列为二类动物疫病。
（—）病原
布鲁氏菌属有6个种，分别为山羊布鲁氏菌、牛布鲁氏菌、猪布鲁氏菌、沙林鼠布鲁氏菌、绵羊布鲁氏菌和犬布鲁氏菌，因其形态上没有区别，都是细小的短杆状或球杆状，因此称其布鲁氏菌。本菌不产生芽抱，不能运动，革兰氏染色阴性。
（二） 流行病学
1936年试验证明梅花鹿易感布鲁氏菌，梅花鹿布鲁氏菌病首次被确定于1940年。国内外对梅花鹿布鲁氏菌病都有流行报道。近年来，随着养梅花鹿业的发展，梅花鹿只的频繁调运，布鲁氏菌病的阳性率逐年增高。2003年杜锐应用ELISA法对采自国内某梅花鹿场的300份血清进行检测，抗体阳性率为14%,证明该梅花鹿场存在布氏杆菌病。2005年李玉梅应用血清学方法，对我国吉林、黑龙江两省梅花鹿成年梅花鹿群未注射布氏杆菌疫苗的874份血清进行了血清抗体检测。结果表明，其抗体阳性率分别为8.87%、26.39%,表明吉林省和黑龙江省的梅花鹿群中存在着布氏杆菌的感染，且公、母梅花鹿均易感。病梅花鹿及其他患病的动物或带菌动物是本病的主要传染源，有高度的侵袭力和扩散力，它不仅可以从破损的皮肤、黏膜侵入机体，还可以经消化道感染，也可经生殖道和呼吸道感染。病梅花鹿或其他病畜流产时的排泄物和分泌物污染饲料、饮水及周围环境，或通过交配，或利用患有本病的病梅花鹿或病畜的乳汁人工哺育仔梅花鹿都能发生感染。梅花鹿感染布鲁氏菌后有一个菌血症阶段，很快定位于其所适应的组织或脏器中，并不定期地随乳汁、精液、脓汁，特别是从母梅花鹿流产胎儿、胎衣、羊水、子宫和阴道分泌物等排出体外。因此，由于人们对此病缺乏足够的认识，在未消毒及采取防护措施的条件下，进行助产和治疗病梅花鹿，最易被布鲁氏菌感染，而被布鲁氏菌污染的物品则是扩大本病扩散的主要媒介。全身性感染和处于菌血症期的病梅花鹿，其肉、内脏、毛和皮含有大量病原体,可导致加工人员受到感染。布鲁氏菌对热非常敏感，7（TC、5~10min即死,但对干燥的抵抗力则较强，在肉、乳类食品中能生存2个月左右，在衣服、皮毛上可保存5个月，在干燥胎膜下可生存4个月，在干燥的土壤中可存活2个月。不同种类梅花鹿、不同性别梅花鹿均易感。成年梅花鹿最易感，幼龄梅花鹿易感性差。
（三） 发病机理
布鲁氏菌有高度的侵袭力和扩散力，它不仅可以从正常的皮肤，而且还可经黏膜侵入体内。它不产生外毒素，主要由内毒素致病。布鲁氏菌侵入机体后，几日内侵入附近淋巴结，被吞噬细胞吞噬。如吞噬细胞未能将菌杀灭，则布鲁氏菌在细胞内生长繁殖，形成局部原发病灶。此阶段称为淋巴源性迁徙阶段，相当于潜伏期。布鲁氏菌在吞噬细胞内大量繁殖导致吞噬细胞破裂，随之大量布鲁氏菌进入血液形成菌血症，此时患病梅花鹿体温升高，经过一定时间，菌血症消失，经过长短不等的间歇期后，可再发生菌血症。侵入血液中的布鲁氏菌散布至各器官中，可在停留器官中引起病理变化，此时体内的布鲁氏菌可由粪、尿排出。但也有个别病例的布鲁氏菌被体内的吞噬细胞吞噬而死亡。布鲁氏菌进入绒毛膜上皮细胞内增殖，产生胎盘炎，并在绒毛膜与子宫膜之间扩散，产生子宫内膜炎。在绒毛膜上皮细胞内增殖时，使绒毛发生渐进性坏死，同时产生一层纤维性脓性分泌物，逐渐使胎儿胎盘与母体胎盘脱离。布鲁氏菌还可进入胎衣中，并随羊水进入胎儿引起病变。由于胎儿胎盘与母体胎盘之间脱离，及由此引起胎儿营养障碍和胎儿病变，使母畜发生流产。布鲁氏菌还可以侵入乳腺、关节、睾丸等部位引起相应的病变。
（四）症状
梅花鹿布鲁氏菌病的特点是母梅花鹿发生流产、不孕和乳腺炎，流产前食欲减退、饮欲增强，从阴道流出灰黄色分泌物，产出多为死胎。公梅花鹿发生睾丸炎和附睾炎，常发生一侧或两侧睾丸肿大，睾丸肿大可达正常的10倍，患梅花鹿不能跑动，两后肢叉开站立，走路姿势异常，局部皮肤紧张，睾丸和附睾化脓，睾丸炎病梅花鹿多生畸形茸。公梅花鹿和母梅花鹿均有关节炎和滑液炎的临床表现，关节肿大病例约占梅花鹿群的3%。多数发生在膝关节滑液囊，一侧或两侧，梅花鹿表现跛行，起卧困难并发出呻吟，个别肿大关节破溃，病梅花鹿常用舌舐肿大破溃关节，常因关节增生而变形，多数病梅花鹿生畸形茸，并与肿大关节对称。梅花鹿发生本病时多呈慢性经过，早期无明显症状，日久可见食欲减退，体质瘦弱，皮下淋巴结肿大，生长发育缓慢，被毛蓬松无光泽、精神迟钝。流产旺期多在妊娠后期，流产率可达60%o子宫内膜炎是母梅花鹿布鲁氏菌病常见症状，由于胎儿在子宫内腐烂，子宫内膜发炎，表现体温升高到42Y,食欲减退或废绝。从阴道内不断排出恶臭脓汁样分泌物，母梅花鹿逐渐消瘦，大部转归死亡。个别病梅花鹿后枕部形成半球形脓肿，临床检查无外伤，春季多发，个别破溃，切开流出1000〜1500ml黄白色脓汁。生茸期茸基部化脓感染，导致梅花鹿茸减产。
（五） 剖检
胎衣，流产胎衣有明显病变，表现为绒毛膜下组织胶样浸润，充血和出血，并有纤维素絮状物和脓样渗出物。外膜常有灰黄色或黄绿色絮状物渗出。间或胎衣增厚，并有出血点。胎儿，真胃中有微黄色或白色黏液和絮状物，胃肠和膀胱黏膜和浆膜上，则可能有出血斑点。浆膜上常有絮状纤维蛋白凝块，有淡红色腹水或胸水。皮下和肌间可能呈出血性浆液浸润。此外,淋巴结、脾脏、肝脏等呈不同程度的肿胀，其中有时散布炎性坏死灶。子宫，绒毛膜充血肿大，上面覆盖黄绿色渗出物，黏膜增厚如皮革样。乳腺,发生实质变性或坏死，间质增生和上皮样细胞浸润。公梅花鹿生殖器官，精囊中可能有出血和坏死灶，睾丸与附睾常见有坏死灶，鞘膜腔充满脓性渗出液；慢性者睾丸及附睾结缔组织增生，肥厚、肿大、粘连，关节肿大及组织增生。
（六） 诊断
根据流行病学、临床症状和剖检变化等综合材料，如慢性病程、母梅花鹿流产、死胎、胎衣病变、乳腺炎、不孕及公梅花鹿睾丸炎和关节炎等可作出初步诊断。确诊则需进行细菌学、血清学和动物接种等实验。细菌学诊断：在细菌学检查时，可从流产母梅花鹿的子宫、阴道分泌物、血液、乳汁采集标本；对死亡梅花鹿可采集肝、脾、骨髓、淋巴结进行培养；对流产胎儿可从胃内容物、肝、脾、淋巴结或心血中进行分离培养。隐性感染的梅花鹿，由于往往局限于个别淋巴结，直接培养不易成功，必要时，可做动物接种。
1.镜检法
病料作抹片染色镜检，可用改良的柯氏染色法：抹片干燥后火焰固定；以碱性浓沙黄液染Imin,水洗；以0.1%硫酸脱色15s,水洗；用3%美蓝水溶液复染15〜20s,水洗、干燥后镜检。布鲁氏菌被染成橙红色，背景为蓝色。也可用改良的耐酸染色法：抹片在火焰上固定；用石炭酸复红原液作1：10稀释，染色lOmin,水洗；用0.5%醋酸迅速褪色；不得超过30s,水洗；1%美蓝复染20s,水洗，镜检。布鲁氏菌染成红色，背景为蓝色。
2. 培养法
本菌为需氧兼性厌氧菌。常用血清琼脂、胰冻琼脂、甘油肝汤琼脂或马铃薯琼脂。为避免革兰氏阳性菌生长，可在培养基中加入结晶紫（1/70万~1/20万国际单位），或多黏菌素E和杆菌肽（每100ml培养基中分别加入6000IU和2500IU）；在空气潮湿地区和季节，为防止霉菌生长，可在每100ml培养基中加入1%放线菌酮（取放线菌lg溶于50ml丙酮中，再加入50ml水，不必消毒）。初次分离时生长缓慢，常要8-15d才能充分发育,但经驯化后传代，则在48、72h就能生长良好。在马铃薯培养基上培养48h后，菌落呈现微棕黄色，色素可溶于培养基中。在普通琼脂上形成圆形、微突起、边缘整齐、带有淡蓝色有荧光的透明菌落，培养时间较长则变为灰色浑浊而不透明。在普通琼脂上生长缓慢，而且很容易引起变异。在肉汤中培养24~48h,呈均匀浑浊生长，继而发生灰白色黏稠沉淀，不形成菌膜。由于布鲁氏菌吸收染料的过程非常慢，较其他细菌难于着色，所以可用沙黄、孔雀绿两种不同染料进行鉴别染色，布鲁氏菌呈红色，而其他菌被染成绿色。
3. 动物接种法
豚鼠在接种前应作凝集反应，接种后经20~30d剖杀，取肝、脾和淋巴结接种于琼脂斜面上（不加抗生素）。剖杀时还应采血做凝集反应，如果血清凝集价为1：5或更高，即使分离不到布鲁氏菌，也应诊断为布鲁氏菌病。
4. 血清学诊断法
目前血清检查布鲁氏菌病主要有两种方法：补体结合反应，在动物感染后7〜14d出现阳性，特异性和敏感性较高。但方法操作复杂，不适于大群检疫用。血清凝集反应动物感染后4~5d即可出现阳性，随后凝集升高，可持续1、2年之久，且操作方法简单，易被现场接受。是当前检查布鲁氏菌病常用方法。该法分试管凝集反应和平板凝集反应两种，二者的复合率相当，但平板法最简便易行，广泛用于现场布鲁氏菌病诊断。
此外，还可利用PCR、荧光定量PCR、基因芯片等方法进行检测。
（七）防治
清净梅花鹿场的预防措施坚持自繁自养的原则，如果需血液更新，必须从布鲁氏菌病清净场引进梅花鹿。在隔离情况下进行严格检疫，确认健康者方能入场。同时，加强饲养管理和卫生防疫措施。受威胁梅花鹿场的防疫措施：如果梅花鹿场附近家畜有布鲁氏菌病流行，要严格加强水源、牧场和饲草的管理，一定与疫畜划区使用，防止水源、牧场和饲草与家畜、家禽及野生动物接触。定期进行检疫，及时发现病原，对检疫阳性梅花鹿实行淘汰，阴性梅花鹿定期免疫接种。病梅花鹿群防制措施一定采取防止传播，逐步扑灭的原则。同时要采取一系列综合措施：对病梅花鹿群每年实行定期用血清凝集反应进行普遍检疫，每次检疫的阳性梅花鹿应与阴性梅花鹿严格隔离饲养，严禁阳性梅花鹿与阴性梅花鹿接触。如果梅花鹿群阳性比例较低时，可将检出的阳性梅花鹿实行全部扑杀处理，阳性梅花鹿比例较大时，可淘汰开放性病梅花鹿和无饲养价值的阳性梅花鹿，暂不能淘汰的阳性梅花鹿一定与健康梅花鹿隔离饲养，必要时进行药物治疗。免疫接种经多次检疫仍有新阳性病例出现，则可对阴性梅花鹿群实行免疫接种。以每年一次，经数年后可达到净化目的，接种量和途径可按上述方法进行。除每年按兽医卫生要求进行消毒外，当梅花鹿群检出阳性梅花鹿后，阳性梅花鹿污染的圈舍、用具应进行一次严格彻底消毒，并坚持常规定期消毒，消毒可选用2%氢氧化钠等药物，同时，按常规对梅花鹿场进行杀虫和灭鼠工作。该菌对一般的消毒药比较敏感，如2%来苏儿、0.2%漂白粉、5%石灰水等都能在数分钟内杀死本菌。庆大霉素、卡那霉素、链霉素对本菌有抑制作用，而对青霉素不敏感。
(A)预防接种
目前在动物中常用布鲁氏菌疫苗有3种(布鲁氏菌猪型二号弱毒疫苗、布鲁氏菌羊型5号弱毒冻干疫苗和布鲁氏菌19号冻干疫苗)，其免疫效果均佳。但梅花鹿多用布鲁氏菌羊型5号弱毒冻干苗。
1. 免疫对象
不同年龄公梅花鹿、母梅花鹿、幼梅花鹿和仔梅花鹿均可使用。
2. 免疫途径
皮下注射和饮水。第1年免疫为肌内注射，以后各年均采用饮水给苗。
3. 免疫用量
肌肉接种不分成年或幼年梅花鹿一律每头肌内注射250亿活菌数。哺乳仔梅花鹿30亿〜40亿活菌。口服给苗。不分成年或幼年梅花鹿一律每头饮用400亿活菌数。
4. 免疫适宜时间
每年11月为宜，因该时期相对为生产静止期。
5. 免疫注意事项
该疫苗为活菌疫苗，因此疫苗在运输和保存时不宜受热。注射免疫母梅花鹿在配种1个月前进行，公梅花鹿宜在性成熟前注射，老弱残及怀孕母梅花鹿不宜注射。疫苗不准与抗生素并用。疫苗稀释后，需当天用完，隔日不准再用。饮水给苗严禁用热水，防止疫苗活菌被烫死。饮水给苗一定要均匀，按20头梅花鹿一群为宜，梅花鹿群不宜过大，计算好每头梅花鹿饮水用量，并于饮水前断水1次，以确保每头梅花鹿喝到足够量饮水。按每头梅花鹿用量将菌苗搅拌均匀后迅速饮服，不得停留时间过长，以免活菌苗死亡而影响免疫效果。本疫苗有一定残余毒力，工作人员接触易引起感染。使用时要注意人员保护，不准徒手搅拌疫苗；工作人员应穿戴手套、口罩、工作服和胶靴，用后消毒。严防菌苗液散布污染环境。稀释和注射疫苗的用具，用后一定煮沸消毒。饮水用饮水槽可日晒消毒。饮水免疫一定远离水源，禁止将疫苗倒入河水或溪水中，也不能在河水或溪水中洗涤接种疫苗用具。免疫期1年。