所谓人工授精,就是用人工方法,将公孔雀的精液采出,然后用特制的器械将精液送到母孔雀的生殖道内,达到配种的目的。这种配种方法提高了优秀公蓝孔雀的配种效能,延长使用年限,提高了卵的受精率,减少公花孔雀的饲养数量,降低了生产成本。
(1) 采精前的准备和训练:参与人工授精的公孔雀应单独隔离饲养,避免因公性之间的争斗和母性的干扰而消耗体力。采精期间要消耗大量的营养,因此在采精前1个月就应加强公孔雀饲养管理,加强营养物质的补充。采精前3~4h对公孔雀禁水禁食,以避免采精时排出粪尿,污染精液,影响精液的质量。
初次采精的公白孔雀在采精前15d要进行采精训练,使之形成人工采精的条件反射,容易达到自然射精的状态和提高精液品质、数量。每天应定时训练1~2次,连续3~5d。在训练过程中应将性反应弱、排精量少而品质差的公孔雀及时淘汰。
(2) 采精技术:公孔雀的采精方法有按摩法和电刺激法。一般情况下,每隔2~3d一次,采精一般需要3人配合操作。采精前应先剪掉肛门周围的羽毛,清洁肛门周围皮肤后,用75%的酒精棉或碘伏消毒。
① 按摩法:保定者坐在椅子上,公孔雀头朝向保定者,将公孔雀放在腿上,并握住公孔雀的双翅。采精者用张开的左手连续几次按摩,每次由荐部向尾部进行,另一只手从腹部中央向泄殖腔口方向连续按摩,双手相互配合,同时按摩到尾部,公孔雀会出现性反射,表现出尾羽上翘、泄殖腔张开甚至外翻。这时采精者用左手或双手拇指和食指频频挤压按摩泄殖腔周围,使公孔雀性欲增强,生殖凸起达到充分勃起,排出乳白色精液。集精者左手保定公孔雀双腿,右手拿集精杯收集精液。
② 电刺激采精法:保定者握住公孔雀双腿使其自然分开。采精者右手持极棒缓慢插入泄殖腔,左手控制电刺激采精仪的电源开关,通电后用极棒先刺激泄殖腔,当公孔雀生殖凸起外翻时,再用极棒刺激凸起。开始电压为2~3V,每次通电刺激2s,连续刺激3次,再逐渐升高电压,反复刺激,直至精液采出为止。集精者(兼辅助保定孔雀)随时准备收集精液。
(3) 精液保存与质量评估:精液采集后接下来的工作就是如何保存并有效地利用。精液不能受阳光的直射,要密封保存以防脱水和污染。视预定保存时间采用不同的保存方法。如果精子是常温保存,就需要在采精后的半小时内给母孔雀授精使用,否则精子很快失去活力,造成受精率降低。如果是短时间(36h以内)保存,保存温度应为2~5无,如果是长时间保存,应采取冷冻超低温-196P保存。
精液采集后可立即进行评估,在实验室里,可对精液样品中的精子数、精子活力及形态进行检测。在某些特殊情况下,还需要做更多的检测(如精液代谢率的评估等)。评估精液质量最简单的指标是精子的数量及活力。
① 外观检查:正常的精液应为不透明的乳白色液体。如果呈现粉白色且比较黏稠,则可能被尿酸盐污染;如果呈现黄褐色,则受到粪便污染;如果呈现粉红色,则有可能被血液污染;如果呈现水样,可能含有大量的淋巴液,是由于采精时对泄殖腔组织用力挤压造成的。被污染的精液不要再用于人工授精。
② 精液量检查:公孔雀一般一次平均射精量为0.5~1.3ml,射精量随孔雀年龄、季节、体况和采精者的熟练程度等有较大的变化,一般选择射精量多且稳定的公孔雀供种用。
③ 精子活力的检查:在自然环境中,精液20min内可保持原有的活力,因此应在采精后20min内检测精子的活力。其方法是取1滴温(约37Y)生理盐水和1滴精液,置于载玻片上,混合均匀,盖上盖玻片,用400倍显微镜检查,呈直线向前运动的精子才具有受精能力,如超过90%证明受精率较高。
④ 精子数量的检查:通过精液浓度等级、精子比容可以测定精子的数量,也可以通过血球计数器或自动计数器计数。生产实践中经常用到估测法,将精液滴在载玻片上,盖上盖玻片,然后放在400倍的显微镜下,上下调整焦距至焦点观察精子。如果视野中精子数很多,精子聚集在一起,很难区分出单个的精子,一般认为是浓稠的精液;如果视野中精子数很多,精子间距中等,一般认为是中等密度的精液;如果视野中精子间距空隙较大,一般认为是较稀的精液。
(4) 精液的稀释:
①精液稀释的目的:一是降低了精子浓度,扩充精液容量,增加输精母禽数;二是给精子提供能量,保持了酸碱度及渗透压的平衡,防止脱水,延长精子的保存时间。
② 稀释液种类:采集后马上进行人工授精的精液中可加入等渗糖类及生理盐水作为常用稀释液。常温短期保存的精液中可加入明胶、PH偏低等物质的稀释液。低温保存的精液中可加入含有甘油、DMSO等抗冻害物质的稀释液。
③ 通过实验室对精液质量进行检查,来确定稀释倍数。一般可将精液与稀释液按照1:3〜1:5的比例混合。稀释方法,用滴管或注射器吸取一定剂量的温稀释液,然后插入精液内,将稀释液缓慢挤入精液中。稀释后的精液一般可配种20-30只母孔雀。
(5)输精技术:无论采用何种保存方法,在使用精液前,都应把精液的温度提升到35〜38无。
输精工作由2~3个人配合完成,负责保定、按摩和输精操作。保定者倒提母孔雀,按摩者用手掌向尾部方向按摩背部或稍稍用力按压左腹部和泄殖腔壁,通过有效刺激,泄殖腔会张开,阴道在泄殖腔左壁开口。当阴道外翻时,输精者轻轻将输精器插入输卵管开口中央1~2cm深处,当泄殖腔收缩将输精器包紧时,停止按摩,将精液输入。
(6) 人工授精注意事项:
① 采精场地应安静,应尽量做到固定术者和服装不宜变动太勤,以促使公孔雀建立按摩排精的条件反射。
② 捕捉时动作要快、轻、准确无误,否则会影响精液质量。采精授精操作要轻、正确并迅速连贯,使孔雀感到舒适,否则会引起粪尿的排泄,甚至造成孔雀生殖器官的损伤及过度刺激。
③ 人工授精前3~4h禁食禁水。
④ 输精时不要将空气注入阴道内(输精器内含有气体或按压输精器胶头用力过大可将空气注入阴道)。
⑤ 孔雀大多在下午产蛋,人工授精应在群体大部分产蛋后进行,以傍晚最好。一般每4d进行一次授精。
⑥ 任何与精液接触的用具都必须洁净、干燥且没有消毒剂残留,在采精和输精前要用38〜40龙的稀释液或生理盐水冲洗,使之预热。每输1只母孔雀用消毒棉花擦拭输精器。
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