羊驼检胚与胚胎质量鉴定

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先将集卵杯倾斜,轻轻倒去上清液,留10毫升冲卵液,再用杜氏磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗集卵杯,倒入表面皿镜检。随后准备3〜4个培养皿,依次编号,倒入10%或20%羊驼血清OBS保存液,将培养皿放入培养箱待用。准备300-400毫米玻璃细管和玻璃棒,消毒备用。用10倍体视显微镜找到受精卵,先用玻璃棒消除卵周围的黏液,将胚胎吸至第一培养皿内,用吸管先吸少量杜氏磷酸盐缓冲液(PBS)后再吸卵,并在不同部位冲洗3〜5遍,用同样方法在第二培养皿内处理,然后把全部卵移至另一培养皿内,观察所收集胚胎的数目、形态和发育状况。
未受精卵呈圆形,外周有一圈折光性强的透明带,中央为质地均匀色暗的细胞质。透明带与卵黄膜之间的空隙很小;受精卵依据第二极体的出现和卵周隙的扩大进行判断。发育正常的胚胎透明发亮,卵周隙明显,分裂球大小均匀,非正常胚胎透明带和胚胎变形,有时透明带不明显,胚胎发暗,卵裂球界限不清或细胞萎缩。
胚胎发育:第2〜3天胚胎处于2〜8细胞期,可看到卵裂球,卵黄腔间空隙较大;第5~6天为桑根胚,只能看到球状的细胞团,分不清裂球,细胞团占据卵黄腔的大部分;第6~7天桑模致密,细胞团变小;第7〜8天胚胎为囊胚,最初细胞团的一部分出现发亮的胚胎腔,当细胞团充满卵黄腔时,内细胞团和滋养层界限明显,胚胎腔清晰可见;第8〜9天囊腔扩大至原来的1.2〜1.5倍,透明带变薄,相当于正常厚度的1/3;第9~11天胚腔继续扩张,透明带破裂,受精卵脱出。我国将胚胎分为A、B、C三级。A级为优质胚,作冷冻保存用;B级是普通胚,宜作移植用;C级为不良胚,不能利用。胚胎形态完整、呈球形,轮廓清晰,卵裂球大小均匀,胚内细胞结构紧凑,色调和透明度适中,无附着的细胞和液泡的为A级;胚胎轮廓清晰,色调和细胞密度良好,有少量附着的细胞和液泡,变性细胞占10%〜30%的为B级;胚胎轮廓不清晰,色调较暗,结构较松散,游离的细胞和液泡较多,变性细胞占30%〜50%的为C级。

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